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离心液相层析法提取色谱纯卵磷脂

卵 磷脂又称磷脂酞胆碱,    广泛应用于生物遗传工程及临床等方面。     虽然蛋黄中含磷
 
脂 相当丰富, 而且其中卵磷脂占总磷脂的比例高达约 7 0 外, 但由于磷脂种类复杂, 性质相近 , 不易被分离, 而又易于氧化、 水解, 故大量提取色谱纯卵磷脂有一定困难。 目前国内尚
 
无 色谱纯卵磷脂产品供应,     国外在近 30  年来对色谱纯卵磷脂提取、   精制方面已做 了大量
 
工 作。    从且a n al  a n  等山 开始,    先后有人试用双柱、   单柱或高效液相层析、   离 子交换 及
 
经 化学修饰的卡普隆吸附法等法,      所有方法都有一定 的缺 点,     直到 19 81  年还在改 进
中 〔1 ~ 石, 
 
本 文旨在寻找适合国内情况,   并能快 速、  有效地大量 提取色谱纯卵磷脂 的方法。    经试
 
验对比证 明,   下列方法实际可行。
材 料 与 方 法
 
一 、材料药品 与仪器
 
新 鲜鸡蛋黄、  氧化铝、  硅胶 G 和硅胶 H (层析用规格) 、  氯仿、   甲醇、   乙醇、   丙酮和氯化
 
幅 均为分析纯 。
 
离心液相层 析仪 ( 日本、   日立 C L O一 5 型 ) ,      原子吸收光谱仪( 日本,    日立 1 8 0 7 0 型 ) ,   锚
 
离子 选择电极。二、 方法 ( 一 )
1 . 有机溶 剂 法提取粗品 卵磷脂  取一定量的新鲜鸡蛋黄,      用适当有机溶剂 反复 沉淀、  溶解、  蒸掉 溶剂 、  干燥,  得淡黄色蜡状粗品卵磷脂,   低温保存。
 
2 . 离心 液 相 层析 法精制 卵磷脂 于离心液相层析仪的进料孔加入 防漏剂, 用有机溶剂将氧化铝调 制成稀浆, 由进料孔连续灌入。 同时 , 将离心盘转速调**“ 第 5 挡;, 待氧化铝铺盘完毕, ` 立即自动连 续吸入有机溶剂, 使转盘中央保持适量溶剂。 取粗品卵磷脂上样液
 
一定量 ,   吸入转盘进料孔,   上样完毕。   立即吸入有机棍合洗脱液,   控制流量 ,   每馏分为 02 ~
 
05  m l ,    收集洗脱液,   第 1 ~  3 管为无色澄清液 ,  第 4 ~  5 管出现微黄色澄 明液,  第 6 ~  7 管为
 
乳光液体, 第 8 ~ 1 4 管为无色澄清液。 从 6 ~ 41 管用显色剂检验呈阳性, 第 场 管以后转阴性。 阳性各馏分液分别经单向薄板或硅胶纸层析证实为色谱均一的卵磷脂。 合并液经
 
减压 蒸掉溶剂,  得 白色蜡状精制品卵磷脂。
 
还可用硅 胶吸 附剂替代 氧化铝,   用有机溶剂调成浆液,     控制转盘 转速为“ 第 5 挡”  ,     将
 
硅 胶浆灌入进料孔,    进行铺盘,   硅胶层厚 3 ~ ,    取一定量粗品卵磷脂上样液,   由进料孔上
 
样 ,   待上样完毕,   将洗脱剂连续进入进料孔,  控制流量,  收集洗脱液以每馏分为 20 ~50  m l,
 
用显色剂检验呈阳性反应 ,  第 1 ~  2 管无色液,    第 3 ~  4 管黄色液,    均为阴性,   第 5 ~  8 管无
 
色澄清呈阳性反应 , 第 9 管以后又转阴性, 经薄板或硅胶纸层析鉴定为一个斑点, 合并色谱均一的馏分, 减压蒸去溶剂、 干燥, 得白色蜡状精制卵磷脂。
 
三、     方法 ( 二)
 
1 . 氛化 锡 复合 法提取粗品 卵磷 脂 取一定量 的新鲜蛋黄, 用有机溶剂提取 3 次, 提取液过滤后, 用氯化福溶液沉淀完全, 静置 2 五J 过 滤, 得白色沉淀物, 用有机溶剂沉淀、 溶解, **后 得白色蜡状物。
2 . 离心液 相层析法精制卵磷脂  将已铺有氧化铝的离心转盘,      控 制 转速在  第 压
 
 , 由中央进料孔吸入溶剂。 然后将上述 1 . 中复合物溶液取一定量上样。 上样完毕, 由进料 口 连续吸入有机棍合洗脱液, 控制流量 , 用紫外吸收监测, 自动收集馏分。 同时用显色剂作阳性检测 , 将单向薄板层析为同一斑点的馏分合并。 合并液减压蒸去溶剂, 得精制
卵磷脂
 
精制卵磷脂的质量鉴 定是通过单向薄板层 析:6[ 与美国 肛G M A 优质卵磷脂 进 行对比。 同时又 以 引进双向薄板层 析确证为一个斑点。 **后通过硝化定磷、 氮, 求得氮磷比
值 。杂质检测 ,   通过原子吸收光谱及福离子选择电极法检测偏离子含量 ,   合乎规定要求。
 
 
讨 论
 
在方法( 一 ) 中粗品卵磷脂提取的后过程中改用氯仿取代石油醚,      实验结果表 明不仅
 
不影响精制品的质量与收率,   且可改善操作条件,  提高安全性,   有利于大量生产。
 
对精制品卵磷脂质量鉴 定方法上 的改进 ,   除了采用历来所沿用的单向薄板层析之外,
 
又 以引进的双 向薄板层析法,     来提高色谱纯 精制品质量 的可靠性。      同时又采用硅胶纸 取
 
代 薄板进行层析鉴定,    效果相同,     但使用硅胶纸因可省去铺板,     因而在方法上更为简便实
 
用。
 
方法 ( 二 ) 的特点是氯化 福复合沉淀所得粗制品包含色素杂质极少 , 色 泽较 白。 在精制品质量检测方面改用原子吸收光谱和福离子选择电极法, 可进一步提高对微量福离子
 
检测 的灵敏度,   以保证所得到 的卵磷脂质量符合要求。
 
采用制备型 离心液相层析法 精制 卵磷脂,     在国内外均尚未见有报道。      由于该法不仅
 
塔板数多 ,    分离效率高,     而且离心洗脱流量大,    因而可以大大缩短精制过程的时间,     比六
 
十年代的报道方法快 1 5 ~  18  倍。
 
生 产上采用离心液相层析法的可能性:   同类型离心层 析仪在国内已有产 品供应 ( 北京
 
青 云仪器厂、 L B O  型 ) 。 若作为大规模生产上专用还可简化结构, 放大产量 , 设计成专用型离心液相层 析仪, 从材料与技术方面 来看, 在国 内是完全可行的。
 
总之,     采用上述方法 ( 一 ) 或 ( 二) 来提取卵磷脂粗品,    配合离心液相层析精制法,     快速
 
提取较大量 的色谱纯 卵磷脂是 实际可行的。
 
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